L-蘋果酸是檸檬酸循環(huán)的組分之一,在所有有機(jī)體中都存在。定量檢測L-蘋果酸在葡萄酒、啤酒、面包、果蔬產(chǎn)品及化妝品和藥品的生產(chǎn)中很重要。L-蘋果酸是Z重要的果酸之一。在葡萄酒生產(chǎn)業(yè),L-蘋果酸和L-乳酸是蘋果乳酸發(fā)酵中兩項非常重要的監(jiān)測指標(biāo)。在很多時候如在低熱量飲料生產(chǎn)中L-蘋果酸經(jīng)常用作防腐劑和增香混合物。
產(chǎn)品分類
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測定L-蘋果酸需要進(jìn)行兩步酶促反應(yīng),*步:在L-蘋果酸脫氫酶(L-MDH)的催化作用下,L-蘋果酸被煙酰/胺腺嘌呤二核苷酸(NAD+)氧化生成草酰乙酸
第二步:為了使反應(yīng)(1)*進(jìn)行,需要進(jìn)行第二步反應(yīng),在超量的L-谷/氨酸的存在下,由谷氨/酸草酰乙酸轉(zhuǎn)氨酶催化,草酰乙酸和L-谷氨/酸生成L-天冬氨酸和2–酮戊二酸。
生成的NADH的量取決于L-蘋果酸的量,NADH的量可根據(jù)340nm下吸光度值的增加測定。
特異性, 靈敏度, 測量范圍和精確度:
該實驗方法是專門測定L-蘋果酸含量,D-蘋果酸,L-乳酸,L-天冬氨酸和延胡索酸不反應(yīng)。
檢測中zui小吸光光度差異為0.005個吸光度單位,這相當(dāng)于zui大樣品體積為2.00 mL時L-蘋果酸濃度為0.12 mg/L(或相當(dāng)于樣品體積為0.10 mL時,濃度為2.49 mg/L)。檢測限為0.25 mg/L,這是在zui小吸光光度差異為0.010吸光光度單位,zui大樣品體積為2.00 mL得到的。
該實驗的線性檢測范圍為0.5-30ug L-蘋果酸。同一樣品進(jìn)行重復(fù)測定,吸光度值可能會產(chǎn)生 0.005-0.010吸光度單位的差異。當(dāng)樣品體積為0.10 mL,這相當(dāng)于L-蘋果酸濃度大約在2.49-4.98 mg/L之間。如果樣品是經(jīng)過稀釋的,在計算結(jié)果時候需要乘以相應(yīng)的稀釋系數(shù)(F),如果在樣品制備階段,樣品被稱重,如:10g/L,可能會產(chǎn)生0.02-0.05g/100g的差異。