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根據檢測原理的不同,目前常用的轉基因植物檢測技術主要有兩大類:一類為蛋白水平的檢測方法,如免疫試紙條法、蛋白質芯片和酶聯免疫吸附法等; 另一類為核酸水平上的鑒定方法,如PCR以及PCR相關的檢測技術,還有核酸雜交和基因芯片等方法。蛋白質水平的檢測是基于所轉的目的基因在轉基因植株中得到了表達,通過檢測這些蛋白的存在來確定轉基因。由于這些鑒定方法只適用于新鮮的和未加工過的轉基因材料,并且當轉入的基因表達量低時也無法檢測,因此這些方法并未得到廣泛采用。DNA水平上的檢測方法主要是基于PCR反應,但這些檢測方法都需要熱循環PCR儀,實驗程序復雜并且檢測時間較長,難以滿足非實驗室條件下的快速篩查和檢測的需求。最近幾年出現了恒溫條件下的等溫擴增技術,其中研究較熱的一個技術就是環介導等溫擴增法(Loop-mediated isothermal amplification,LAMP)。LAMP檢測方法快速,能在恒溫65℃下完成整個反應且實現了在反應管中肉眼對反應結果的判讀,已經成功應用于轉基因大豆的檢測,但仍然需要恒溫加熱設備。
研發出的一種等溫擴增技術,它能在37-42℃恒溫條件下快速完成數十億DNA擴增。RPA反應體系中主要包括重組酶(uvsX)、單鏈結合蛋白(Gp32)和鏈置換DNA聚合酶Bsu,其反應原理不同于體外DNA復制的PCR技術,重組酶uvsX在常溫下就能打開DNA雙鏈進行變性,因此不需要熱循環PCR儀。RPA反應技術靈敏度高,反應快速,并且通過試紙條可以直接進行觀察,方法簡便易行。因此,本文的目的是建立一個轉基因大豆的RPA快速檢測技術,利用試劑條顯色反應實現肉眼鑒定樣品中是否含有轉基因成分,并對日常接觸到的大豆食品和種植的大豆進行初步應用。
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檢測項目 | 規格 | 貨號 |
CP4EPSPS | 50條 | STX74000/0050 |
Bt-Cry1Ab/1Ac | 50條 | STX06200/0050 |
Bt-Cry3Bb1 | 50條 | STX06100/0050 |
Bt-Cry1Ac | 50條 | STX05203/0050 |
Bt-Cry1F | 50條 | STX10301/0050 |
Bt-Cry34Ab1 | 50條 | STX04500/0050 |
mBt-Cry3A | 50條 | STX06700/0050 |
Bt-Cry2A | 50條 | STX05801/0050 |
CspB | 50條 | STX35500/0050 |
NPT II | 50條 | STX73000/0050 |
Vip3A | 50條 | STX83500/0050 |
eCry3.1Ab | 50條 | STX49000/0050 |
Bt-Cry1F & Bt-Cry34Ab1 | 50條 | STX10900/0050 |
Bt-Cry1F, Bt-Cry1Ac & CP4 EPSPS | 50條 | STX 13200/0050 |
Bt-Cry1F, Bt-Cry2Ab2, Bt-Cry34Ab1 & Bt-Cry3Bb1 | 50條 | STX63200/0050 |
Bt-Cry2A, Bt-Cry1Ac & CP4 EPSPS (RR) | 50條 | STX51001/0050 |
Bt-Cry2Ab & Bt-Cry1Ab/1Ac | 50條 | STX06801/0050 |
CP4 EPSPS (RR) & Bt-Cry1Ab/1Ac | 50條 | STX74500/0050 |