當(dāng)樣品溶液滴入樣品孔后,樣品溶液中的孔雀石綠與金標(biāo)抗體相結(jié)合,進(jìn)而封閉金標(biāo)抗體上孔雀石綠的抗原結(jié)合點(diǎn),阻止金標(biāo)抗體與纖維素膜上孔雀石綠蛋白偶聯(lián)物結(jié)合,使之顯色較弱,甚至不顯色;反之,如樣品溶液中沒(méi)有孔雀石綠,則不能阻止金標(biāo)抗體與纖維素膜上的孔雀石綠蛋白偶聯(lián)物結(jié)合,從而顯色較強(qiáng)。
在試紙條的中央判讀區(qū)噴有2條線,上面一條為對(duì)照線(C線),下面一條為測(cè)試線(T線)。若樣品液中沒(méi)有孔雀石綠,則T線顯色比C線強(qiáng),或顯色與C線相近;若樣品中孔雀石綠的濃度大于檢測(cè)*,則T線始終顯綠色,C線始終顯紅色。
快速檢測(cè)條的操作步驟:
樣品處理:取水產(chǎn)品可食部分用剪刀剪碎或絞肉機(jī)絞碎后準(zhǔn)確稱取10.0g于50mL離心管中,加入提取劑A5mL,提取劑B7mL,混勻振搖5分鐘后用濾紙過(guò)濾,取上清液4mL于50mL刻度離心管中,加緩沖液3滴,然后用蒸餾水稀釋至25mL。
過(guò)層析柱(活化層析柱,依次加1..5mL活化劑,4mL蒸餾水,洗耳球上加壓,廢液舍棄):連接抽提裝置,分次把上清液加入層析柱中,用抽提裝置從下口加壓,加快流速,建議25mL樣本通過(guò)柱子的時(shí)間為5-8min。待樣液*流干后加4mL蒸餾水洗滌層析柱。
3、衍生化:將1mL衍生化試劑(用滴瓶滴22滴)加到層析柱中,用洗耳球加壓*流干后,再加入2mL蒸餾水?dāng)D干,再用1mL洗脫液洗脫[注意:要控制流速盡可能慢](先用滴瓶滴11滴洗脫,用洗耳球加壓擠干,廢液舍棄,再滴入11滴洗脫,用離心管收集),加1滴緩沖液后振蕩混勻待檢。